1. 由于BEH HILIC色譜柱不含有鍵合相，因此pH操作范圍為1~9，操作溫度上限為45 ℃。

2. 與其他液相色譜柱一樣，BEH HILIC色譜柱在pH、壓力和溫度的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

色譜柱平衡

1. 初次使用本色譜柱時(shí)，用50倍柱體積的50%乙腈: 50%水溶液（含最終濃度為10 mM的緩沖液）平衡色譜柱。

2. 初次進(jìn)樣之前，用20倍柱體積的流動(dòng)相（初始條件）平衡色譜柱。

3. 如果采用梯度條件，在進(jìn)樣之間用8~10倍柱體積的流動(dòng)相平衡色譜柱。

4. 色譜柱平衡不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間漂移。

流動(dòng)相注意事項(xiàng)

1. 流動(dòng)相或梯度中應(yīng)始終保持至少3%的極性溶劑（例如3%水/3%甲醇或2%水/1%甲醇等）。這樣可以確保ACQUITY BEHHILIC顆粒始終保持水合狀態(tài)。

2. 流動(dòng)相或梯度中應(yīng)始終保持至少40%的有機(jī)溶劑（例如乙腈）。

3. 避免在HILIC流動(dòng)相中使用磷酸鹽緩沖液以防止出現(xiàn)析出，但可以使用磷酸。

4. 相較于甲酸或醋酸等添加劑，使用諸如甲酸銨或醋酸銨的緩沖液可獲得重現(xiàn)性更好的結(jié)果。如果只能使用添加劑（例如甲酸等）而不是緩沖液，請(qǐng)使用0.2% (v:v)的濃度，而不是0.1%。

5. 為了獲得理想峰形，應(yīng)始終保持流動(dòng)相/梯度中含有濃度為10 mM的緩沖液。

進(jìn)樣溶劑

1. 如果可能，進(jìn)樣溶劑應(yīng)使用95%乙腈。極性溶劑（如水、甲醇和異丙醇）應(yīng)減少到總體積的25%。

2. 通用的進(jìn)樣溶劑為75:25乙腈/甲醇，該溶劑可以很好地平衡分析物溶解性和峰形。

3. 請(qǐng)避免進(jìn)樣溶劑中含水和二甲基亞砜(DMSO)，這些溶劑將導(dǎo)致非常差的峰形。

4. 通過(guò)反相固相萃取(SPE)用乙腈置換掉水或DMSO。如果無(wú)法實(shí)現(xiàn)，則用有機(jī)溶劑稀釋水或DMSO。

其他技巧

1. BEH HILIC色譜柱專用于保留極性非常強(qiáng)的堿性化合物，而對(duì)于酸性、中性和/或非極性化合物的保留性能有限。

2. 分析小分子(< 200 Da)強(qiáng)極性堿性化合物時(shí)，理想流速范圍為0.4~0.8 mL/min。

3. 相較于Atlantis™ HILIC硅基HPLC色譜柱，BEH HILIC色譜柱在梯度分析中的保留性降低20%，在等度分析中的保留性降低35%~65%。這是因?yàn)?/span>BEH顆粒表面的硅醇?xì)埢鶟舛雀汀?/span>

4. 切記水在HILIC分析中是非常強(qiáng)的溶劑。因此，必須去除或盡可能減少進(jìn)樣溶劑中的水。

5. 初步探索色譜條件時(shí)，可運(yùn)行95%乙腈至50%乙腈的梯度。若無(wú)保留，可運(yùn)行95:3:2乙腈:甲醇:水相緩沖液的等度條件。

6. 可使用諸如甲醇、丙酮或異丙醇之類的極性溶劑代替水以增強(qiáng)保留性能。

7. 如果使用ACQUITY UPLC系統(tǒng)，弱洗針液應(yīng)嚴(yán)格按照初始流動(dòng)相條件中的有機(jī)相百分比配制，否則分析物峰形或保留性能可能會(huì)受到影響。

8. 建議通過(guò)在工作流程中加入HILIC質(zhì)量控制(QC)參比物質(zhì)來(lái)監(jiān)控系統(tǒng)的運(yùn)行狀況。